C、血清学证实试验：刮取三糖铁琼脂上的培养物，用生理盐水制成菌悬液，稀释至与MacFarland3号比浊管相当的浓度，0单价血清如果原效价在1∶(160～320)，则可1∶40稀释(用0.5％盐水)，在10mm×75mm试管内，将稀释的抗血清与菌悬液等量混合，于50.6℃水温中16h后观察结果，如果出现凝集，可证实为该O因子。
（2）出血性大肠埃希杆菌：已知为出血性肠炎患者的粪便，可划线接种以山梨醇代替乳糖的麦康凯琼脂平板，经培养后，挑选3～5个山梨醇不发酵的菌落，以O157血清(最好同时再以H7血清)作玻片凝集试验和单管凝集试验以确定诊断。
分离的菌株应接种三糖铁琼脂，悬挂靛基质试纸片，经36℃培养18～20h，典型的生化特性为乳糖，蔗糖产酸，葡萄糖产酸产气，H2S阴性，靛基质阳性，并接种山梨醇发酵管，为迟缓发酵。
（3）毒性大肠埃希杆菌：
A、生化试验：于鉴别平板上挑取可凝菌落5个，一般挑取乳糖发酵的典型菌落，分别接种三糖铁琼脂，悬挂靛基质试纸片，经36℃培养18～20h，凡是乳糖，蔗糖产酸，葡萄糖产酸并多产气，H2S阴性，靛基质阳性的菌株，可证实为大肠埃希杆菌，如果靛基质为阴性时，还必须V-P试验阴性，且不能在西蒙枸橼酸盐琼脂上生长，方可证实为大肠埃希杆菌。
B、肠毒素试验：产毒性大肠埃希杆菌主要靠肠毒素试验证实，肠毒素试验的方法甚多，国内目前以双相琼脂扩散试验测定LT，以乳鼠灌胃试验测定ST，有时亦采用家兔结扎回肠段试验以测定LT和ST。
当前已有采用基因诊断法测定这两种肠毒素。
a、双向琼脂扩散试验：将被检菌株按5点环形接种于Elek培养基上，以同样操作，共做两份，于36℃培养48h，在每株菌的菌苔上放一片多黏菌素B纸片，于36℃经5～6h，使肠毒素渗入琼脂中，在离菌苔各5mm处的中央，挖一个直径4mm的圆孔，并用一滴琼脂垫底，在孔内滴加LT抗毒素30μl，并用已知产LT和不产毒菌株作对照，于36℃培养15～20h观察结果，在菌斑和抗毒素孔之间出现白色沉淀带者为阳性，否则为阴性。
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