软下疳主要通过性行为传播。感染后，大约2至5天，患者外生殖器会出现小红点，迅速发展成脓疱，继而在2至3天内破裂形成溃疡。溃疡边缘不规则但柔软，周围组织充血，底部富含血管的肉芽组织覆盖着脓性分泌物，常使患者感到疼痛，触摸时痛感加剧。溃疡周边可能伴有2到5个小型“卫星”溃疡，若不治疗，症状可持续数月，最终留下疤痕。
诊断软下疳需考虑近期性行为史，特别是不洁性行为，结合典型临床表现与短暂潜伏期后出现的特征性溃疡。直接镜检和细菌培养能检测到杜克雷嗜血杆菌，辅以PCR技术检测该菌DNA，可确诊。诊断标准包括：阴部一个或多个溃疡；暗视野显微镜检查排除梅毒螺旋体；梅毒血清试验阴性；溃疡边缘样本经特定染色法未能发现朵诺凡小体，但可见短小的革兰氏阴性杆菌。
检查方面，通常涉及以下步骤：直接从溃疡处取样，使用不同染色技术如美蓝染色或革兰氏染色，在高倍镜下检查，便于发现杜克雷嗜血菌。此外，通过穿刺抽取脓液进行培养检查也是重要手段，尽管培养条件较为苛刻。常用的培养基有GCHGS和MHHb，能促进细菌生长，24到48小时内形成特征性菌落，进一步的生物化学测试可确认菌种。
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