1、一般化验检查：低氨基酸血症，尿糖阳性，血糖升高或葡萄糖耐量下降，血沉增加，正细胞正血色素性贫血，胰头部肿瘤十二指肠液中可发现瘤细胞。
2、血浆胰高血糖素放射免疫测定：基础测定胰高血糖素多显著增高，可超过1000pg/ml，为正常值5～10倍，正常值为50～100pg/ml，文献记录胰高血糖素瘤病人血浆胰高血糖素可达380～9600pg/ml，口服或静脉注入葡萄糖往往不能抑制高血糖素的分泌；血浆胰高血糖素激发试验：在难于确定诊断的病例，可使用胰腺A细胞促分泌剂，如精氨酸，丙氨酸，注射后血浆胰高血糖素增高，但此种反应也见于原发性或继发性的胰岛A细胞增生，故此试验并非胰高血糖素瘤的特异性诊断方法。
3、甲苯磺丁脲(D860)试验：正常人静脉注射甲苯磺丁脲可刺激胰岛素的分泌而抑制胰高血糖素，使血糖降低，在胰高血糖素瘤的病人中，静脉注射甲苯磺丁脲相反可引起胰高血糖素明显升高，胰岛素也缓慢升高，但血糖下降不明显或只缓慢下降，这一试验提示有胰高血糖素瘤的可能性。
4、对外源性胰高血糖素的反应：正常人静脉注射0.25～0.5mg胰高血糖素后，血浆胰岛素及血糖浓度明显升高，但在胰高血糖素瘤病人，因长期血浆中内源性胰高血糖素增高，则对外源性胰高血糖素不敏感，虽静脉注射胰高血糖素，其血浆葡萄糖浓度的反应仍很迟钝，本法的迟钝反应可为诊断胰高血糖素瘤的有用方法，但敏感者则不能排除本病。
5、钡餐检查及十二指肠低张造影：仅对胰头部胰岛细胞瘤的诊断有帮助，表现在十二指肠降段内侧壁有所改变，但本病发生在胰头部极少，有的病例出现空肠，回肠的粗皱壁，其原因不清楚。
6、腹腔动脉和胰动脉血管造影：对胰岛细胞瘤有的诊断可达70％以上，但不能明确肿瘤来自何种细胞。
7、肝胰超声扫描和CT扫描：可诊断胰的原发病灶及肝有否转移病灶。
8、肿瘤组织电子显微镜观察：瘤细胞符合胰岛A细胞的特点；瘤组织中含高浓度的胰高血糖素。
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