一、血糖测定：临床症状发作时，即抽血测血糖，若血糖低于40mg/dl，则可作为重要的诊断依据，但在发作稍晚时抽血，有时可因体液调节，代偿作用不能反映出严重的低血糖状态。
二、定性诊断
1、饥饿试验：方法简便易行，阳性率可达80％～95％，临床症状不典型，空腹血糖>2.8mmol/L（50mg/dl）者方可做此试验，一般在禁食12～18h后（水除外）可诱发低血糖发作；禁食24h阳性率为85％；禁食48h阳性率为95％以上，禁食72小时为98％，增加运动诱发低血糖，尤其是血糖水平下降，而血浆胰岛素水平不下降，具有诊断意义，如经72h禁食而仍未诱发低血糖者，可除外本病，此试验必须在严密观察下进行，并备好抢救措施，防止发生意外，连作三次检查，空腹血糖2.8mmol/L（50mg％）以下者，可确诊为胰岛素瘤，轻症病人，禁食可延长至24～48h以上，病人每次发作低血糖性昏迷，抽搐，均可能加重脑神经细胞的损害，故在有典型症状的病人，不宜再作此激发试验，在检查过程中，一旦症状出现，应立即静脉内注射50％葡萄糖液，使其症状缓解。
每4～6小时测定1次血糖，胰岛素和C-肽水平，如低血糖发作严重时，当血糖≤2.5mmol/L（45mg/dl）应即刻终止试验，并静脉注射50％葡萄糖60～80ml，尤其伴有肝病和垂体-肾上腺功能减退者亦可诱发严重低血糖，必须警惕。
2、口服葡萄糖耐量试验（OGTT）：多次测定空腹血糖，而且<2.8mmol/L（50mg/d），则对胰岛素瘤有重要诊断价值，口服葡萄糖100g后，血糖上升不高，不超过5.6mmol/L（100mg％），或上升至高水平而于2～3h迅速下降至低水平并维持5～7h，由于胰岛素的自主分泌，对葡萄糖负荷后不产生反应性，故血浆胰岛素浓度可为正常，增高或降低，与正常反应性不同，一般认为在服糖后1h呈早期低血糖症，或2～3h出现低血糖并一直呈低平曲线时，这是因为胰岛素分泌增多，使血糖迅速被转化和利用，胰岛素瘤或胰岛组织增生时，具有自主性分泌，可能时而多，时而少，甚至暂停止分泌时，使受抑制的正常β细胞功能尚未恢复，此时可能出现糖尿病曲线，必要时静脉内留置针头，30min取血标本1次，连续5h，目前认为口服葡萄糖耐量试验对本病诊断价值不大。
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