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真菌过敏性哮喘是怎么引起的(4)

(1)空气中曝片及镜检计数方法:

①曝片方法:于空气中暴露涂有软凡士林黏附剂的载玻片(25mm×75mm)。将涂有黏附剂的载玻片放于取样器内,每天定时取放片,该片在空气中暴露24h。在取回的载玻片上放一块甘油胶染色剂,微溶后盖22mm×22mm的干净盖玻片。一般于次日进行镜检。

②镜检计数方法:镜检时,将载玻片放在显微镜载物台上,自左至右,慢慢移动推尺,到头后推尺轻轻上移,将载玻片推上一个新的镜检部分,再从右往左移动推尺。以此类推,顺序把盖玻片覆盖范围全部看完。详细记录真菌的种类与数量。某医院于1989-08-01~1990-07-31每天上午10点暴露涂有凡士林黏附剂的载玻片一张,24h取回,加1滴中性树胶,盖22mm×22mm盖玻片,全盖玻片镜检,记录真菌孢子、菌丝体数量。全年曝片365张,共收集真菌孢子10.1112万个,菌丝体片2367个,已鉴定真菌孢子10.1089万个,共37个种属。

(2)空气中曝皿及镜检计数方法:

①曝皿方法:将带有消毒培养基的平皿(直径10cm)在空气中暴露3~5min。暴露地点可根据需要而定。暴露完毕,将平皿放置在室温下或25℃恒温箱中培养。每天观察、记录生长的菌落及鉴定其名称。平皿应放置在固定地点,观察时要轻轻取放,防止真菌孢子被震落,造成培养基的污染而影响调查计数的准确性。一般以每周或每月曝皿一次,时间应与曝片一致,至少以1年为限。

②镜检计数方法:为了防止因某些真菌生长迅速,很快长满培养皿,影响其他真菌生长,孢子一旦生成,应马上进行分离鉴定并记录。一个菌落即作为一种真菌记录。统计时,菌落与真菌种类要分别计算。我院应用11cm培养皿,马铃薯葡萄糖、蔡氏、沙氏三种琼脂培养基在曝片处、医院门前广场和病区设置3个固定点曝皿,每点三皿,半月一次,每天上午10点曝皿3min,25℃生化培养箱内培养,每天观察,记录菌落数,直到无新菌落出现为止,挑取菌落用直接压片或载玻片培养方法于镜下鉴定,对已鉴定的真菌进行显微照相,并转入试管琼脂斜面培养和保存。全年曝皿24次,共216个琼脂平皿。收集菌落3012个。